Este estudo foi conduzido em dois locais na Bélgica (Antuérpia e Mechelen), de junho a novembro de 2019. Os participantes foram recrutados de junho a agosto de 2019. Durante as duas semanas de triagem, os próprios participantes avaliaram suas evacuações utilizando a escala BSFS. Sessenta e quatro voluntários saudáveis que, frequentemente, apresentaram fezes endurecidas (fezes BSFS 1 e 2 na frequência de ≥50% durante a triagem) foram igualmente alocados no grupo LcS ou placebo. Os participantes no grupo LcS consumiram um frasco de leite fermentado contendo LcS diariamente por oito semanas. Os participantes do grupo placebo consumiram um frasco de uma bebida placebo (leite não fermentado sem LcS) diariamente, pelo mesmo período. Este estudo envolveu uma coleta de fezes de três dias em três pontos (período basal), com quatro e oito semanas de intervenção. Os participantes foram instruídos a coletar todas as fezes produzidas durante o período, assim como registrar a pontuação BSFS para cada defecação ao longo deste estudo – registro ISCTN (ISRCTN34762792).
A bebida teste continha o LcS ou uma bebida placebo correspondente. O LcS (cepa YIT 9029) foi obtido do Culture Collection Research Laboratory do Yakult Central Institute (Tóquio, Japão). Um frasco (65ml) da bebida teste continha 42,3 kcal/182 kJ, menos de 0,1g de gordura, 9,6g de carboidrato, 0,01g de sódio e 0,9g de proteína. A bebida contendo LcS era um leite fermentado contendo pelo menos 6,5 x 109 unidade formadora de colônia (UFC) de LcS por frasco. Os ingredientes eram água, leite desnatado (reconstituído), xarope de frutose-glicose, açúcar, dextrina, aromas e LcS. A bebida placebo correspondente foi leite não fermentado contendo os mesmos ingredientes, exceto o LcS, e a acidez foi ajustada com ácido lático.
As bebidas teste foram produzidas na Yakult Europe B.V. (Almere, Países Baixos), distribuídas e armazenadas abaixo de 10°C. Não havia estudos anteriores passíveis de comparação. Em estudos similares, 20-40 participantes por grupo foram incluídos para confirmar a eficácia do LcS na função intestinal e, portanto, partiu-se do pressuposto de que seriam necessários 30 participantes por grupo para demonstrar o efeito amolecedor das fezes pelo LcS. Considerando uma taxa de conclusão sem desistência ou desvio sério de protocolo de 0,95 (de dados internos), foram necessários 64 participantes (32/grupo) para este estudo.
A randomização foi executada por um estatístico independente não envolvido no estudo (Adriaens Consulting BVBA, Aalter, Bélgica). As informações dos participantes como sexo, idade e índice de massa corporal (IMC) coletadas foram repassadas ao estatístico. A distribuição por igual de variáveis como sexo, idade e IMC foi garantida entre os participantes de cada grupo. O estatístico não cego substituiu as informações de agrupamento de cada participante por um código (AAA ou BBB) para manter o cegamento para os indivíduos não envolvidos na randomização. Esta lista de randomização cega foi, então, enviada aos locais do estudo, onde a alocação foi realizada. O processo de abertura do cego ocorreu após o bloqueio do banco de dados.
